两种蛋白激酶磷酸酶在P2Y嘌呤受体介导的人前列腺癌细胞侵袭中的调控机制研究

【作者】 贺慧颖； 方伟岗； 郑杰； 衡万杰； 李燕；

【机构】 北京大学医学部病理系；

【摘要】 目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶5(MKP5)在P2Y嘌呤受体激活人前列腺癌细胞系MAPKs信号通路中的调节机制及作用特点,以及与肿瘤细胞侵袭能力的相关性。方法:利用具有不同转移潜能的人前列腺癌1E8(高转移)和284(不转移)细胞亚系;构建野生型.pcDNA3-SHP2-wt、突变型pcDNA3-SHP2-cs及野生型pcDL-SRα-MKP5真核表达质粒。免疫沉淀法检测1E8、284细胞在ATP刺激下SHP2酪氨酸磷酸化的程度。利用脂质体法将以上质粒分别稳定转染入1E8和/或2B4细胞并筛选鉴定阳性克隆。免疫印迹法检测各转染组细胞在ATP作用下ERKl/2和p38的活化情况。应用Matrigel穿膜实验检测各组转染细胞在ATP刺激前后的体外侵袭能力。结果:ATP可以短瞬激活1E8和284细胞的SHP2发生磷酸化,且在高转移的1E8中的程度高于低转移的284。转染野生型SHP2可使284细胞中ATP对ERK1/2的激活作用时效明显延长;而突变型SHP2延迟并降低1E8细胞中ATP对ERK1/2的激活水平;而野生和突变型SHP2的转染对细胞p38的活性均无明显影响。表明SHP2可能对P2Y嘌呤受体激活的ERK1/2起正性调节作用,而不参与p38活性的调节。在野生型MKP5转染细胞组中,ATP对p38的激活程度明显降低,表明野生型MKP5能部分阻断ATP对p38的活化。转染野生型SHP2的284细胞与对照组相比,穿膜细胞数明显增多;而转染突变型SHP2的1E8细胞穿膜细胞数明显降低。提示SHP2可能以正性调节的方式参与细胞的侵袭行为。转染野生型MKP5的细胞和其对照组相比,无论是1E8还是2B4,穿膜细胞数均明显减少,提示p38在维持细胞的侵袭能力中起作用。ATP可促进各组细胞的穿膜能力。在2B4细胞中野生型SHP2可部分增强ATP的作用,穿膜数增加比例为85.7%±0.018,明显高于对照组的72.2%±0.014。而突变型SHP2则一定程度抑制了1E8细胞对ATP的反应。表现为穿膜数增加比例仅为66.7%±0.082,显著低于对照组的112.8%±0.032。转染野生型MKP5也能部分抑制ATP的这种作用。结论:SHP2正性调节P2Y嘌呤受体介导的ERK活化,并可能以此促进肿瘤细胞的侵袭能力。而MKP5通过抑制P2Y嘌呤受体介导的p38活化并降低细胞的侵袭能力。进一步证实了在ATP激活促进细胞体外侵袭的过程中,ERK通路和p38通路的激活均起重要作用。SHP2和MKP5可以针对MAPKs的不同靶点对P2Y瞟呤受体介导的信号通路发挥不同的调控功能。更多还原