MACE-3/CEA(HLA-A2\A24+)肽疫苗诱导肿瘤患者特异性CTL的研究

【作者】 刘虹； 邵莹； 徐琪； 任秀宝； 张澎； 张乃宁； 郝希山；

【机构】 天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫室；

【摘要】 目的:本研究探讨肿瘤患者经 MAGE/CEA 肽疫苗诱导后特异性 CTL 的杀伤活性。方法:本院收治的消化道肿瘤患者18例, 另有其它肿瘤患者7例,年龄范围:30-77岁。以 CS-3000收集患者富集血50ml,分离外周血单个核细胞（PBMC）,37℃、5%CO₂孵箱孵育 1.5小时。取培养液上清,加入 IL-2（1000u/ml）,培养 LAK。贴壁 PBMC 细胞中加入 GM-CSF 及 IL-4（1000u/ml）,孵箱孵育7天诱导培养 DC。7天后收集细胞,加入 HLA-A2/MAGE-3,HLA-A24/ MAGE-3、HLA-A24/CEA 肽及β₂微球蛋白（终浓度3ug/ml）冲击,孵箱孵育2-4小时。混合培养:按 DC:LAK 为1:10混合培养1周, LAK,LAK+DC 细胞分别培养后,收集细胞,分别加入荧光抗体 CD3、 CD4、CD8、CD25、CD69、CD86、CD45RO/CD8、CD16/CD56、HLA-DR、 igG/IgG 标记,行流式细胞仪检测（CoulterXL）激活 CTL 细胞表面标记。以肽诱导的 DC+LAK 作为效应细胞,Mel526,803,Raji,K562作为靶细胞,以 MTT 法检测特异性 CIL 的杀伤力。结果:LAK 细胞与 LAK+DC 细胞对 Raji 和 K562细胞株的杀伤活性无显著性差异。 LAK 细胞与 LAK+DC 细胞对 Mel526和803细胞株的杀伤活性有显著性差异。LAK 细胞与 LAK 联合 DC 细胞培养的细胞免疫标志检测表明,CD3、CD4、CD25、CD16/CD56均无显著性差异,表达的 CD8、 CD86、CD69、CD45RO/CD8、HLA-DR 有显著性差片。结论:以 MAGE -3/CEA（HLA-A2\A24+）肽疫苗冲击诱导 DC 后与 LAK 细胞联合培养可以活化静息的 T 细胞、诱导出特异性 CTL 细胞,产生 MAGE、 CEA 特异性的 CTL 应答。结果表明 DC 为基础的疫苗是肿瘤免疫治疗的重要的新方法,因其简便、快速的特点,具有良好的前景。更多还原