E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞杀伤作用及其机理研究

【作者】 刘然义； 彭吉林； 罗慧玲； 蔡体育； 吴沛宏； 曾益新；

【机构】 中山医科大学肿瘤防治中心；

【摘要】 目的:研究 E1B 55KDa 缺失的腺病毒 dl1520在体内外对鼻咽癌 CNE-2细胞的杀伤作用及其杀伤机理。方法:在体外,用 MTT 法测量 dl1520对 CNE-2细胞的生长抑制作用;不同剂量 Ad-GFP、 dl1520和野生型腺病毒 Ad-2致 CNE-2细胞病变试验;1MOI(感染复数)病毒感染 CNE-2细胞72h 后,用空斑形成试验测定三种病毒在 CNE-2细胞中的产量;DAPI 染色后在荧光显微镜下观察病毒感染的 CNE-2细胞核的变化。将 CNE-2细胞接种至裸鼠皮下成瘤后,瘤内注射 dl1520(1×10~9pfu/次,连续五天,注射介质为阴性对照), 观察肿瘤生长情况;取治疗后的肿瘤组织和瘤旁组织用免疫组织化学方法检测腺病毒外壳蛋白的表达。结果:在体外,dl1520对 CNE-2 细胞生长具有明显抑制和杀伤作用,IC50为73.6 MOI,而在同样剂量时 Ad-GFP 对 CNE-2的生长影响不大;5MOI 的dl1520就可以引起明显的细胞病变,与0.1MOI 野生型腺病毒相似,而 Ad-GFP 在 200MOI 时也只能导致较轻的病变;空斑形成试验测得 CNE-2细胞中 Ad-2、dl1520和 Ad-GFP 病毒产量分别为:567、387和0.06pfu/细胞;DAPI 染色发现 dl1520感染的 CNE-2细胞核明显膨胀,极少见到核浓缩和核裂解现象。瘤内注射 dl1520能明显抑制 CNE-2裸鼠移植瘤的生长,治疗组肿瘤生长速度和瘤重明显小于对照组(p＜0.05, n=6);免疫组化结果显示在 dl1520治疗组肿瘤组织中存在大量病毒外壳蛋白的表达,而瘤旁组织及对照组肿瘤组织中均未见病毒外壳蛋白表达。结论:dl1520在体内外对 p53突变的 CNE-2细胞生长具有明显的抑制和杀伤作用,其机理主要是通过复制裂解杀伤肿瘤细胞,而非诱导肿瘤凋亡。dl1520在裸鼠体内对 CNE-2细胞的杀伤作用具有选择性。更多还原