细胞分子技术与流式细胞分析在阿霉素耐药性研究中的重要作用

【作者】 郑国强； 陈香玲； 韩复生； 刘叙仪； 徐光炜；

【机构】 北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院外科北京市肿瘤防治肿瘤防治研究所；

【摘要】 目的:探讨细胞分子技术和流式细胞仪(FCM)在肿瘤耐药细胞系(S-180R&BGC-823/DOX)阿霉素耐药性检测中的应用价值。材料与方法:应用细胞药物毒性分析(MTT)、DNA、RNA 分子杂交 (SOUTHERN &NORTHERN BLOT)、逆转录聚合酶链反应(TT-PCR)、免疫组化、FCM 的检测方法,在 DNA、RNA、蛋白质水平以及耐药倍数、细胞内药物含量等方面对肿瘤耐药细胞系进行分析。结果:S- 180R 耐药倍数66;耐药细胞多药耐药基因出现 DNA 扩增、RNA 转录、蛋白水平的表达,亲本细胞为阴性。耐药细胞与亲本细胞药物荧光含量为259:2.9,耐药培养二年后,耐药细胞峰半峰宽/峰高比值由 0.56变为0.23。BGC-923/DOX 耐药倍数为6.35倍;耐药和亲本细胞均有多药耐药基因 DNA 扩增、RNA 转录、蛋白表达;耐药与亲本细胞药物荧光含量为638.5:326.1。结论:在阿霉素耐药性检测中,FCM 可以直观地检测耐药细胞峰中个体耐药细胞之间耐药性的离散或均一。不但在高、低倍数耐药细胞系耐药性的分析中具有灵敏、准确、定量的特点,而且是肿瘤耐药性灵敏的、功能性检测方法。DNA、RNA 分子杂交(SOUTHERN &NORTHERN BLOT)、逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)、免疫组化是阐明耐药细胞分子水平耐药机理有效方法,同时也是判定高倍数肿瘤耐药的有效手段,在肿瘤耐药和逆转耐药的研究中,具有重要的定性作用。更多还原