盐生杜氏藻RNAi应用中电激转化条件的研究

【作者】 孙国华； 隋正红； 张学成；

【机构】 中国海洋大学海洋生命学院；

【摘要】 <正>本文探讨了电激转化盐生杜氏藻的条件,实现了质粒 pBI211-cat 的瞬时表达;并在此基础之上构建 RNAi 表达载体 pBIRNAI-Dsa,实现 pds 基因的表达抑制。采用了两种电激模式 -高电压低电容模式下3-7 kV/cm 和低电压高电容模式下300-500 V/cm 转化质粒 pBI221-cat: PCR 扩增检测 cat 基因部分序列及组织化学染色法 GUS 检测也同时证明质粒 pBI221-cat在盐生杜氏藻中瞬时表达。在此基础之上,插入 pds 基因的正反向重复序列,构建 RNAi 表达载体 pBIRNAI-Dsa,电激方法转入杜氏盐藻细胞,荧光定量 PCR 结果表明,转入干涉载体 pBIRNAI-Dsa 的实验组的 pds 基因表达显著下降,最低达对照组的28%,表达受到抑制。更多还原