微小亚历山大藻总RNA提取方法的比较研究

【作者】 高越； 李何阳； 洪华生； 王大志；

【机构】 厦门大学近海海洋环境国家重点实验室； 国家海洋局第三海洋研究所；

【摘要】 本文比较研究了不同抽提试剂(TRIZOL、异硫氰酸胍、总 RNA 提取试剂盒)、细胞破碎方式(冻融、液氮研磨、玻璃珠破碎)以及不同生长期(延滞期、指数期、稳定期和衰亡期)微小亚历山大藻(Alexandrium minutum)总 RNA 提取效果,用1%变性凝胶电泳、紫外分光光度法及 TR-PCR 扩增(反转录 PCR)检测总 RNA 的抽提效果,建立和完善了亚历山大藻总 RNA 提取方法。结果表明,总 RNA 的抽提效果与细胞破碎方式、亚历山大藻的生长周期以及抽提试剂等密切相关:实验所用三种试剂都能抽提到总 RNA,但抽提效果以玻璃珠破碎法最好,液氮研磨次之,冻融法效果最差,其中,液氮研磨不易在无酶条件下进行,容易带入外源污染;三种试剂的抽提效果分别为 TRIZOL 抽提的总 RNA 有28S,18S,5.8S 三条带,胶孔中有部分杂质,总 RNA 试剂盒抽提效果与异硫氰酸胍法相似,抽提的总 RNA 杂质较少,但只在28S 有条带,无其他片断 RNA 条带;指数期藻细胞(15000个/ml)活力较好,比较适合抽提总 RNA。总之,本研究结果表明,在亚历山大藻指数生长期,采用玻璃珠破碎方法和 TRIZOL 试剂可提取到高纯度和高稳定性的 RNA,用于亚历山大藻 RNA 及相关研究。更多还原