球藻藻红蛋白和藻蓝蛋白共价交联物的构建及其与天然藻胆体特性的比较研究

【作者】 马圣媛； 王广策； 孙海宝； 曾呈奎；

【机构】 中国科学院海洋研究所；

【摘要】 用蔗糖密度梯度超速离心的方法从单细胞红藻---紫球藻（ Porphyridiumcruentum）中分离纯化了完整的藻胆体。光谱分析表明,藻胆体在可见光区域有四个吸收峰（545nm, 565nm, 618nm和650nm）和一个吸收肩（498nm）;荧光发射峰分别在680 nm和595nm,二者的比值(λ_680nm^em/λ_595nm^em)可高达 10以上,说明分离的藻胆体非常完整。非变性电泳结果显示,分离的藻胆体至少有三种颜色的条带,分别为:B-PE,R-PC和b-PE,APC可能含量很少而未见到。SDS-PAGE电泳鉴定至少有三条明显的带,为PE的α和β的重叠带,γ亚基和RPC的亚基。川秆基磷灰打层析和Seph的x口-20o层析的方法分离到了高纯度的sbo藻红蛋白、卜藻红蛋肉和较纯的R-藻监蛋肉。光谱检验发现,分离得到的藻胆蛋白均为天然态,其中藻红蛋肉的荧光发射峰在580urn左心,藻蓝蛋白的荧光发射峰在640urn左右。SDS-PAGE电泳分析,B＆红蛋肉有两条带,分于量人约在18kD,3kD。小分子量的条带极宽,是因为a和卜亚基的分于量相近,所以有重叠;人分于量的条带是Y亚基。相对应的是卜藻红蛋白只有 18kD的条带,无Y亚基的条带。藻蓝蛋白有两条明显的条带,人约为门kD和 20kD。 川戊 珊共价交江的方法得到了紫球藻8-藻红蛋白和凡藻蓝蛋肉的共价结合体。吸收光谱沙叨,交联体的吸收峰在s’snm和引sum,且前者的峰高较对照的增加,后者的峰高儿乎不变。同时,对照中藻红蛋肉的563nm的吸收峰变成吸收肩。另外一个明显的不同是d:紫外光！灭,交联体的278nffi的峰高增加并且蓝移到26肋一 交联后220nffi附近肽键的吸收峰也升高。交联体的荧光发射光谱与对IN相比,498nffi激发产生的峰值在588n叫[6的发射峰)41 640urn（P的发射峰）,而对照只有 590nln的发射峰,而且交联体在 588urn的峰高明显低了对照。非变性山泳鉴定,发现有与对照不同的新的条带出现。这一切证明藻川蛋肉能绣传巡模w共价交联成功。人厂构建的交联物和大然的藻胆体相比,对低离-f迎没和低温更为稳定,但能齿传递效率相对较低。更多还原