人ZP3基因在毕赤酵母中表达

【作者】 曹佐武； 陆进丽； 李文星； 丰一兴；

【机构】 暨南大学生殖免疫研究所；

【摘要】 目的:建立表达人卵透明带ZP3基因的Pichia potarios酵母系统,为研究受精机理和发展透明带避孕疫苗提供材料。方法:用PCR方法扩增出大小约为1.3kb的hZP3 DNA片断,用EcoR Ⅰ酶和Xbal Ⅰ酶双酶切后,连接到pPICZαA质粒的多克隆位点上,然后导入大肠杆菌Top 10菌株中,利用pPICZαA质粒对Zeocin抗生素的抗性筛选出转化子,并对转化子进行酶切鉴定以及基因测序。重组质粒pPICZαA-ZP3经过Sac Ⅰ酶切线性化后,电击转化导入X33毕赤酵母中,通过Zeocin的多次筛选高转化拷贝转化子,用甲醇诱导表达hZP3。结果:酶切结果显示hZP3 DNA已经插入pPICZαA质粒的多克隆位点上。基因测序显示hZP3 DNA序列正确。在高浓度的Zeocin中筛选出高拷贝hZP3重组基因的工程酵母,甲醇诱导表达后,培养液分泌产生特异的hZP3蛋白。结论:人ZP3重组蛋白在毕赤酵母中获得表达。更多还原