小鼠着床丝氨酸蛋白酶2 cDNA的抗体制备、免疫组化分析及抗体阻断试验

【作者】 黄哲平； 王健； 余浩； 黄萍； 沈维雄； 左嘉客； 杨增明； 申庆祥；

【机构】 上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室； 东北农业大学生命科学学院；

【摘要】 <正> 为了筛选小鼠胚泡着床相关基因,在对孕4.5天小鼠着床和非着床位点的子宫组织进行PCR差减时,发现EST73#的DNA序列与着床丝氨酸蛋白酶2(ISP2)的开放阅读框中的部分序列完全一致。以孕4.5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板,用PCR方法扩增获得ISP2的cDNA。序列分析表明,该cDNA序列中的开放阅读框编码279个氨基酸,并与文献报道完全相同,但在3′非翻译区多204 bp,已登录于GenBank(登录号:AF442819)。为了获得重组ISP2(rISP2),构建了pGEX-4T-2/ISP2表达质粒,进而在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-ISP2,经SDS-PAGE回收的融合蛋白用牛凝血酶酶切,再更多还原