PSA基因扩增研究及其在核酸杂交中的应用

【作者】 褚丽萍； 宋娜玲； 赵启仁； 张春明； 颜廷东；

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室；

【摘要】 目的建立前列腺癌早期诊断方法。方法培养前列腺癌LNCaP细胞,提取LNCaP细胞总RNA,RT-PCR扩增前列腺特异抗原（Prostate Specific antigen,PSA）基因,用洋地黄毒苷标记PSA DNA,通过二次酶放大和时间分辨荧光测量技术测定靶PSA DNA。结果成功培养了LNCaP细胞,提取的总RNA浓度为1701μg/μl,OD₂₆₀/OD₂₈₀=2.1404（>2.0）,纯度很好,经RT-PCR成功的扩增出了PSA基因,将扩增DNA用于核酸杂交的二次酶放大时间分辨荧光分析中,结果靶PSA DNA测定的标准曲线线性范围大于两个数量级,灵敏度为10pmol/L,当靶PSA DNA浓度为10、30和60 pmol/L时,准确度和精密度分别为77%-95%和12.9%-15.3%。结论本研究为以PSA基因为靶标的前列腺癌早期诊断新方法的研究奠定了坚实的基础。更多还原