白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒类凝血酶基因工程菌的构建与表达

【作者】 林奕辛； 余晓东； 和七一； 邓敏； 李卉； 陈夏；

【机构】 重庆师范大学生命科学学院重庆市动物生物学重点实验室重庆市生物活性物质工程研究中心；

【摘要】 从中国白唇竹叶青毒腺提取总 RNA,通过 RT-PCR 方法扩增出类凝血酶基因,将该基因克隆到载体 pMD18-T 载体中并进行测序。由此推测出其相应的氨基酸序列。再将该基因克隆到 pET-32a 中。以融合蛋白的形式在大肠杆菌 BL21(DE3)中获得表达,SDS-PAGE 分析表明,融合蛋白以可溶形式和包涵体形式存在于大肠杆菌中,融合蛋白利用金属整合亲和层析进行分离纯化,纯化产物经肠激酶酶切得到类凝血酶,并对其纤维蛋白原凝结活性、纤维蛋白原溶解活性、纤维蛋白溶解活性及抗凝活性进行测定,结果显示具有较强的纤维蛋白原溶解活性、纤维蛋白溶解活性。更多还原