低血清条件下人脐带血间充质干细胞的分离和鉴定

【作者】 李云涛； 徐燕； 葛薇； 孟恒星； 于珍； 李长虹； 万长春； 李茜； 韩俊领； 邱录贵；

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市脐带血造血干细胞库；

【摘要】 <正>目的建立低血清条件下脐带血来源间充质干细胞(MSC)的分离、纯化方法和技术,了解脐血MSC的生物学特性。方法无菌条件下取正常足月剖腹产的肝素抗凝脐带血,取血后4小时内用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,以低血清(2％FBS)DMEM／F12培养基添加表皮生长因子 (EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等进行培养,细胞密度106／ cm2,48～72小时后全量换液。待贴壁细胞层70～80％融合时,胰蛋白酶消化传代,观测细胞形态; 流式细胞仪检测3-4代细胞表面抗原的表达:检测细胞周期、生长曲线并计算倍增时间。以β-磷更多还原