【作者】 徐晓静； 马学恩；

【机构】 内蒙古农业大学动物科学与医学学院；

【摘要】 <正> 目的:建立一种快速检测肠出血性大肠肝菌O157:H7和霍乱弧菌O139的多重PCR方法。为这两种病原体的检测提供新的手段。方法:选择肠出血性大肠杆菌O157:H7的产志贺样毒素基因six1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(uidA);霍乱弧菌O139的肠毒素A亚单位(ctxA)、毒力协调菌毛A亚单位(tcpA)和含有特异性核酸序列的糖基化转移酶(glycotransferase LPSgt)基因序列分别设计引物,经Blast分析确定其特异性。在相同的PCR反应条件下,分别建立肠出血性大肠杆菌O157:H7和霍乱弧菌O139两套三重PCR扩增体系。但由于多重PCR的各产物之间存在不平衡扩增,为使各产物达到相近而且最高的扩增效率和灵敏度,对影响多重PCR扩增效率的因素进行了优化:(1)不同引物用量及比例的优化;(2)Taq酶用量对扩增效更多还原