兔脑炎原虫与靶细胞凋亡的研究

【作者】 潘耀谦； 高丰； 夏志平； 成军； 解月芬；

【机构】 解放军军需大学动物科技系； 河北省蒿城市畜牧局；

【摘要】 兔脑炎原虫是一种严格的细胞内寄生虫,主要侵害的靶器官为肾脏和大脑.据研究报道,兔脑炎原虫在肾脏主要引起间质性肾炎,在大脑主要引起肉芽肿性非化脓性脑炎.两者均为一种慢性病理过程,而急性病变比较少见.因此,兔脑炎原虫引起把细胞的死亡,是一种坏死性死亡,还是一种程序性死亡,目前尚无报道.本研究用甲基绿—派诺宁染色法、碘化丙啶染色法和琼脂糖凝胶电泳法对具有兔脑炎原虫病的特征性症状和病变的8只实验的肾脏和脑组织进了研究,现将主要结果予以报道.用甲基绿—派诺宁染色前,甲基绿溶液先用氯仿纯化,除去其中的甲基紫,然后在室温下染色1小时.镜检,在间质性肾炎比较明显的部位,其附近的近曲小管上皮、特别是含有原虫假囊的肾小管上皮和已脱入管腔的一些上皮,可见其细胞核呈绿色、深绿色或淡蓝绿色;胞浆呈红紫色或深红色.在脑组织,接近肉芽肿,特别是坏死性肉芽肿的神经细胞(包括大脑灰质和脑神经核的神经细胞)出现胞核呈绿色或蓝绿色,胞浆紫红色或暗红色.在坏死性肉芽肿的特异性肉芽组织中,亦见部分变性的上皮样细胞出现胞核呈蓝绿色而胞浆呈紫红色的染色.用碘化丙啶在室温下避光染色30分钟后,选用600nm的激发光,在荧光显微镜下可检出呈不同程度红色荧光的细胞核.这种变化以在近曲肾小管上皮的胞核表现的比较明显,而神经细胞的表现则较轻.细胞核的荧光强弱种度也不一致.有的细胞核浓缩导深红色;有的核染色质呈新月形聚集于核膜一边而见有淡红色弯月样的细胞核;有的细胞体积变小,有胞浆中见有块状红色荧光.用琼脂糖凝胶电泳法将病兔的肾组织(主要采取皮质与髓质交界的部位)和脑组织(主要采取大脑的皮质部)按常规法提取DNA,置于含溴化乙碘的1.5%的琼脂糖凝胶中进行电泳,结果用病兔肾组织提取的DNA具有较明显的“梯状”条带;而病兔脑组织的DNA虽然也见有“梯状”条带,但程度不及肾组织的更为明显.总之,本实验的结果证明兔脑炎原虫主要通过凋亡的方式引起靶细胞死亡,发生作用较缓和.因此,在临床上病兔发病时间较长,多呈慢性经过.更多还原