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大豆叶片全长cDNA文库的构建及表达序列标签初步分析
THE CONSTRUCTION OF THE FULL LENGTH CDNA LIBRARY OF SOYBEAN LEAVES AND PRIMARY ANALYSIS OF EST
【作者】 董志敏; 常汝镇; 关荣霞; 李英慧; 刘章雄; 邱丽娟;
【Author】 DONG Zhimin~(1,2) CHANG Ruzhen~1 GUAN Rongxia~1 LI Yinghui~1 LIU Zhangxiong~1 QIU Lijuan~1 (1 Institute of Crop Science/National Key Facility of crop gene resources and genetic improvement, Chinese Academy of Agricultural Sciences, 100081, Beijing; ;2 College of Agronomy, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161)
【机构】 中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程;
【摘要】 <正> 大豆是世界上食用油和高蛋白的主要植物资源,研究其基因组结构与功能,将从实质上解决大豆遗传研究中所面临的难题,进而给大豆遗传育种和大豆生产带来历史性的飞跃。在进行大规模的全基因组测序前,构建cDNA文库进行表达序列标签分析是目前研究基因组结构与功能的一种主要方法,尤其是以构建全长cDNA文库为技术平台进行功能基因组研究,可以高效,大规模获得基因序列,由于序列包括3′和5′端的非编码区,能大幅度地加快计算机分析、蛋白质表达和功能分析的进程。我们利用SMART方法成功地构建了中国大豆优良品种-绥农14的叶片cDNA文库。文库的构建采用了Creator SMART中的LD-PCR技术,使用1ug mRNA,共进行18个PCR循环,运用分级分离的方法将小于500bp的片段去除,采用1(cDNA):1.5(载体)的连接比例构建了一个库容量为1.2×10~6克隆的cDNA文库,文库重组率接近100%,插入的片段主要集中在0.5kb~1.5kb间,文库冗余性为24.6%,全长率为52.2%。
- 【会议录名称】 全国作物生物技术与诱变技术学术研讨会论文摘要集
- 【会议名称】全国作物生物技术与诱变技术学术研讨会
- 【会议时间】2005-11
- 【会议地点】中国福建武夷山
- 【分类号】S565.1
- 【主办单位】中国农业生物技术学会作物生物技术分会、中国原子能农学会辐射与航天育种专业委员会、福建农林大学、福建省农业科学院