高效液相色谱法测定血浆中托吡酯浓度

【作者】 刘彬； 王刚；

【机构】 重庆医科大学附属儿童医院；

【摘要】 目的建立测定人血浆中托吡酯浓度的高效液相色谱法。方法采用柱前衍生-反相高效液相色谱法。C18柱,紫外检测器。以FMOC-Cl为衍生剂,以对氨基苯甲酸为内标。取待测血浆1ml,置离心管中,加入3ml氯仿,涡旋混匀,离心3min,提取下层氯仿液,用N2挥去有机相,加入150μlFMOC-Cl(500μg/ml)及50μl硼酸盐缓冲液(pH7.7),混合10S,于50℃水浴中反应15min,加入50μl内标溶液,用N2挥干后加入100μl甲醇复溶,取20μl进样。以磷酸盐:甲醇:乙腈(15:70:15,v/v)(用磷酸调节pH至2.3)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为264nm,柱温30℃。结果TPM衍生物的保留时间为3.25min,内标物的保留时间为1.90min,衍生剂的保留时间为2.30min;血浆中内源性物质不干扰测定;TPM衍生物峰面积与内标峰面积之比与TPM浓度呈良好线性,标准曲线为Y=0.0147C+0.568,r=0.9942(n=6),线性范围为3.125~100μg/ml;平均回收率为99.87%,RSD=2.07%;常用抗癫痫药物不干扰TPM的测定。结论该方法操作简便、快速、准确,适用于托吡酯的血药浓度测定。更多还原