糖基修饰聚乙烯亚胺作为肺部基因递释载体的研究

【作者】 陈钧； 蔡佳； 黄平； 高小玲； 蒋新国；

【机构】 复旦大学药学院药剂学教研室；

【摘要】 开发高效、低毒的非病毒载体是目前基因治疗的热点研究领域。本研究设计了一种新颖的适用于肺部基因递释的载体,该载体可以适用于后继的DNA疫苗的呼吸道免疫。本研究利用呼吸道细胞膜上存在凝集素,能特异地与糖基结合的特性,采用具有双功能基团的N-hydroxysuccinimide-PEG-Maleimide(NHS-PEG-MAL),NHS一端专属性地与氨基半乳糖上的氨基结合,MAL一端专属性地与PEI分子多胺中的氨基结合。凝胶阻滞和包封率测定等实验证明PEI分子在修饰0.5%,1%,5%mol/mol糖基后,其与DNA的结合作用降低,但调整N/P值后其与DNA的结合仍较牢固;另外在PEI分子中引入了糖基和PEG的亲水链后,其细胞毒性大大降低。将Gala-PEG-PEI/DNA复合物分别转染HBE细胞(细胞膜上有凝集素表达)和NIH3T3细胞(细胞膜上无凝集素表达),体外转染结果证明1%Gala-PEG-PEI/DNA在N/P为36时的转染效率是PEI/DNA在N/P为6时的3.1倍,而在没有凝集素的NIH3T3细胞上,该复合物的转染效率却仅为PEI/DNA的0.06倍。可见,Gala-PEG-PEI/DNA复合物确实通过受体介导进入细胞,增加了转染效果。体内实验也充分显示了PEG化的优势,1%的Gala-PEG-PEI/DNA在N/P为24,36和48时的转染效率分别为PEI/DNA在N/P为9时的3.0、11.6和6.7倍。更多还原