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人疱疹病毒8型小衣壳蛋白(ORF65)的原核表达及应用
【机构】 青岛大学医学院附属医院检验科青岛大学医学院微生物教研室；
【摘要】 目的构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白 ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达。方法提取 BCBL-1细胞(HHV8阳性而EBV阴性)DNA,PCR技术扩增HHV8 ORF65基因,目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌E．coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得重组抗原。重组蛋白电泳后转至 PVDF膜,与HHV8阳性血清进行免疫印迹反应。对相关病人进行检测,并与Biotrin公司生产的HHV8 IgM和HHV8 I异G抗体IFA 检测试剂盒和Oiagen公司ELISA检测试剂盒进行比较。结果 DNA序列分析表明目的基因序列与HHV8标准毒株相应序列完全一致,SDS-PAGE电泳可观察到31．5KD融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性。基因工程抗原的各项技术指标与Biotrin公司和Oiagen公司检测试剂盒有较好的符合率,对临床标本的检测表明该试剂盒简单、实用、结果稳定可靠。结论 HHV8重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于 HHV8抗体的检测。
【关键词】 人疱疹病毒8型；
Western blot；
小衣壳蛋白；
ORF65；
原核表达；
- 【会议录名称】 第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编
- 【会议名称】第五次全国中青年检验医学学术会议
- 【会议时间】2006-06
- 【会议地点】中国贵州贵阳
- 【分类号】R446.6
- 【主办单位】中华医学会；中华医学会检验分会；中华检验医学杂志编辑委员会