PBL HLA-A mRNA表达的一步法FQ-PCR的建立及初步应用

【作者】 李晓丽； 邹雄； 杨晓静； 张义； 庄学伟； 单宁宁； 王洪春； 赵胜梅；

【机构】 山东大学齐鲁医院检验科；

【摘要】 目的通过建立宿主外周血淋巴细胞(PBL)表面HLA-AmRNA表达程度检测的一步法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,检测肾移植患者移植后外周血淋巴细胞表面HLA-AmRNA的表达程度,并探讨与移植后早期排斥反应的发生及机体免疫状态的关系。方法以G6PDH作内参照,用Taqman探针荧光定量技术,建立检测PBLHLA-AmRNA的一步法FQ-PCR方法;并检测35例随访移植病人的不同时间的60个标本和60例正常人的阈循环数(Ct),然后用REST软件分析PBLHLA-AmRNA的表达水平。结果正常人和51个移植标本的PBLHLA-AmRNA对G6PDH的相对表达量分别是0.036±0.012和0.026±0.015(P<0.05),提示服用免疫抑制药(目前临床用药剂量均偏大)后患者PBLHLA-AmRNA表达减弱,机体免疫状态低,无排斥反应发生但易导致感染、肿瘤等并发症的产生;其中6个移植标本的PBLHLA-AmRNA对G6PDH的相对表达量是0.042±0.017(P<0.05),提示移植患者PBLHLA-AmRNA表达增强,经病例回访查询是5例移植病人在这期间有排斥反应(根据临床表现、肾功能检查、影像学及核医学检查的临床排斥反应期)的发生,其中1例在移植后6个不同时间的标本显示2次增高,每次经治疗后均降低。结论建立的宿主PBLHLA-AmRNAFQ-PCR检测方法简便,特异,重复性好,可信度高,可用于肾移植后PBLHLA-AmRNA表达水平的检测,评估机体的免疫状态,预测排斥反应的发生。更多还原