Id3启动子/荧光素酶报道基因载体的构建及其活性表达

【作者】 李晓军； Kikumi Hata； 秦浚川； Junichiro Mizuguchi；

【机构】 南京军区南京总医院全军医学检验中心； 东京医科大学免疫系； 南京大学医药生物技术国家重点实验室；

【摘要】 目的构建含小鼠Id3(mId3)基因启动子片段的荧光素酶(Luc)报道基因重组载体,研究抗IgM抗体刺激下,小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞内Id3启动子活性的改变。方法用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增mId3基因5’端含启动子序列的DNA片段(mId3-pf),将其亚克隆至Luc报道基因载体pGV-B2,构建Luc报道基因重组载体mId3-pf/pBV-B2。用电穿孔术将mId3-pf/pBV-B2导入WEHI-231细胞,抗小鼠IgM抗体刺激转染后的WEHI-231细胞,24 h后测定胞内Luc活性。结果4种Luc报道基因重组载体转染细胞均表现较高的mId3启动子活性,与空载体转染细胞相比,启动子活性分别升高25～60倍。抗IgM抗体刺激细胞后,Id3启动子活性较未刺激细胞均呈明显增高趋势,增高幅度可达2倍左右。结论mId3启动子/Luc报道基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的表达,为研究Id3的表达调控作用提供了有效的工具,抗IgM抗体诱导WEHI-231细胞Id3的上调表达与Id3转录调控活性的升高有关。更多还原