人心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在大肠杆菌中的表达和纯化

【作者】 侯巍； 许淑芬； 刘玲丽； 杨晓虹；

【机构】 吉林大学药学院； 吉林大学第一医院；

【摘要】 目的获得重组人心肌型脂肪酸结合蛋白,为进一步开发应用奠定基础。方法根据己报道的心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因序列,采用R T-P C R的方法获得心肌型脂肪酸结合蛋白基因。将所得的PCR产物插入原核表达载体pQE30中,得重组质粒((pQE-H-FABP)并转化大肠杆菌大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有六个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果序列分析表明:H-FABP基因成熟肽编码区含有396bp,编码132个氮基酸;与GenBank(NM004012)中己报道的H-FABP分离物的核苷酸序列有99.9%同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的27%,分子质量约为15kDa并与商品化的H-FABP单抗(CIone 686)呈特异性反应。经Ni-2-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论在大肠杆菌中获得了人心肌型脂肪酸结合蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础。更多还原