五例遗传性凝血因子V缺乏症的基因分析

【作者】 曹丽娟； 王兆钺； 苏雁华； 杨海燕； 赵小娟； 余自强； 白霞； 阮长耿；

【机构】 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所；

【摘要】 本文对5例遗传性凝血因子Ⅴ(FV)缺乏患者分别进行基因分析和家系调查,鉴定导致 FV 缺乏症的基因突变。采用一期法检测血浆 FV 活性,ELISA 法检测血浆 FV 的抗原含量,PCR 法扩增 FV 基因的25个外显子及其侧翼序列,DNA 测序并与 Genebank 比对以确定基因异常,限制性内切酶酶切分析或直接测序患者直系家属及正常人相应的等位基因排除多态性影响。分子建模分析突变对整个分子空间结构的影响。结果表明5例患者血浆 FV 活性和抗原含量均明显降低,基因分析共发现6个致病突变,分别为 G69969T(Gly2079Val),C45533T(Arg7 12Ter), C46796T(Arg 1133Ter),G45366A(Cys656Tyr), C46253T(Arg952Cys)及 G16088C(Asp68His),后3个是新的突变位点,其中 C46253T(Arg952Cys)是国际上首次发现的位于 B 区的错义突变。通过对直系亲属和正常人相应的等位基因进行扩增测序或酶切分析证实了3 个新的突变不是基因多态性所致。分子建模表明错义突变后 FV 的稳定性降低。结论:鉴定了5例Ⅰ型遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症的基因突变,其中包括2种无义突变和4种错义突变;错义突变导致 FV 蛋白稳定性降低, 引起血浆中 FV 的含量减少。更多还原