针对Ⅰ、Ⅲ前胶原基因的核酶对瘢痕中成纤维细胞胶原合成的影响

【作者】 朱家源； 朱斌； 唐冰； 李新强； 陈东； 张涛；

【机构】 中山大学附属第一医院烧伤科；

【摘要】 目的构建出针对α1(Ⅰ)型及α1(Ⅲ)型前胶原基因第二外显子(Exon2)片段的核酶,观察两反义核酶对疤痕中成纤维细胞胶原合成的的影响。方法取术中切除的增生性瘢痕, 剪除表皮及皮下脂肪组织,剪成0.5mm×0.5mm×0.5mm 大小,于15%胎牛血清的 DMEM 培养液中行组织块法培养成纤维细胞;根据α1(Ⅰ)型及α1(Ⅲ)型前胶原基因的碱基序列以及锤头型核酶 (Ribozyme)的结构域要求,利用 PCR 分别构建针对各自的 Exon2区域的核酶基因;将构建好的核酶以脂质体包裹后导入培养的成纤维细胞内。采用图像分析法观察核酶对成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白 m RNA 合成的影响。结果成功培养出瘢痕中成纤维细胞,经Ⅲ型胶原蛋白单抗免疫组化荧光染色证实;并经琼脂糖凝胶电泳各得到两个约62bp 的 DNA 片段,与预期的核酶基因大小一致:试验组Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白 m RNA 的表达明显降低,胶原蛋白生成降低,胶原生成明显受抑制。结论应用针对α1(Ⅰ)型及α1(Ⅲ)型前胶原基因第二外显子(Exon2)片段的核酶能有效的抑制瘢痕中成纤维细胞胶原的合成。更多还原