人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件：α₁（Ⅰ）型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

【作者】 袁即山； 利天增； 祁少海； 谢举临； 徐盈斌； 潘姝； 张珑娟； 孔庆瑜；

【机构】 中山大学附属第一医院烧伤科；

【摘要】 目的选择α1(Ⅰ)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体 Oligofectamine 转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量 32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔:转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论获得α1(Ⅰ)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。更多还原