幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)通过减低ILK表达抑制免疫应答的机制研究

【作者】 袁建平； 李萍； 陶晶； 时晓东； 胡宝瑜； 郭晓奎；

【机构】 上海交通大学医学院病原生物学教研室；

【摘要】 幽门螺杆菌(H．pylori,Hp)是一种革兰阴性微需氧菌,定居于胃粘膜,其持续感染与慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌以及胃淋巴瘤的发生密切相关。Hp感染诱导特异性免疫应答,患者可产生高滴度抗体, 胃粘膜有PMNs、单核吞噬细胞、及淋巴细胞募集,然而,这些都不足以根除Hp感染,提示Hp具有逃逸宿主免疫应答的机制。空泡毒素(VacA)是由Hp致病株产生的一种细胞毒素,近年来的研究表明,除了致空泡效应外,VacA还具有一些新的作用,特别是其免疫抑制效应备受关注。本课题组运用Hp野生株与vacA缺陷突变株分别与单核／巨噬样U937细胞共育,发现在vacA缺陷突变株作用后24小时,整合素连接激酶 (integrin-linkedkinase,ILK)表达明显高于野生株作用的宿主细胞,而后者和未与细菌共育的对照细胞基本一致。提示Hp的某些成分诱导ILK的表达,而VacA又恰恰抑制ILK表达。ILK是一丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶, 能直接与整合素β1和β3亚单位的胞浆区相互作用,耦合整合素与细胞骨架,调节整合素依赖的功能。有研究表明,内皮细胞内ILK活性可调节eNOS mRNA的表达。用Hp同源菌株分别作用于U937细胞后,vacA缺陷突变株可诱导巨噬细胞高表达eNOS,而且,从时相上看,eNOS的高表达恰在ILK高表达之后(30小时)。为了研究eNOS表达是否受到ILK的调节,我们构建了稳定过表达ILK的U937细胞株,发现ILK过表达确实诱导eNOS表达升高。eNOS是一种Ca2~依赖的NADPH氧化酶,有研究表明,纯化的eNOS能产生少量02。在较低浓度时,反应性活性氧(ROS)具有重要的生物学意义,包括参与类前列腺素的代谢,活化NF-kappaB, 并在抗微生物感染和免疫清除中发挥重要作用。既然vacA缺陷突变株可诱导细胞表达更高的eNOS,它是否使细胞产生更多的ROS呢?利用激光共聚焦显微镜,我们检测了Hp同源株分别作用于U937细胞后,细胞内产生ROS的差异,发现,vacA缺陷突变株作用后32至38小时,细胞内ROS明显高于对照细胞和野生株作用的细胞。以上结果提示,Hp的某些成分可通过ILK途径诱导eNOS表达,从而使吞噬细胞产生更多的ROS,有利于吞噬细胞对细菌的杀灭;而VacA抑制上述作用,使得VacA阳性的幽门螺杆菌不能诱使吞噬细胞产生足量的ROS。这可能是幽门蜾杆菌逃逸宿主免疫应答的一个重要途径。更多还原