钩端螺旋体预测的部分外膜蛋白基因的克隆表达及多克隆抗体的制备

【作者】 林玮； 杨宏亮； 谭立志； 郭晓奎；

【机构】 上海交通大学医学院病原生物学教研室； 南华大学病原生物学研究所；

【摘要】 【目的】根据功能基因组学的方法预测出钩端螺旋体赖型赖株226个疫苗候选基因,其中120个基因编码外膜蛋白。本研究对其中的6个基因进行克隆表达和鉴定,并制备BALB／c小鼠多克隆抗体,为进一步研究这些疫苗候选基因打下基础。【方法】采用PCR方法扩增出相应的基因后,与原核表达载体pQE31连接,构建重组表达质粒,IPTG诱导大肠杆菌M15表达重组蛋白,Western Blot检测表达蛋白的特异性。对表达的蛋白免疫BALB／c小鼠,并用ELISA方法检测抗体的效价。【结果】成功克隆表达出6个钩端螺旋体赖型赖株预测的外膜蛋白,分别为LA0272、LA0301、LA0365、LA1404、LA1495和LA3469。SDS-PAGE检测结果显示表达的蛋白分子量与预测值相符,Western Blot结果表明表达的均为目的蛋白。免疫BALB／c小鼠后血清的效价均大于1:8000。【结论】钩端螺旋体赖型赖株预测的部分外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了正确的表达,这些蛋白具有较好的免疫反应性。本研究为下一步进行疫苗候选基因的筛选奠定了基础。更多还原