结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化

【作者】 温见翔； 吴少庭； 陈群； 秦莉； 袁仕善； 雷明军； 潘晖榕； 林绮萍； 张仁利； 高世同； 黄达娜；

【机构】 广东医学院微生物学教研室； 深圳市疾病预防控制中心分子生物室； 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系； 华南农业大学动物医学系；

【摘要】 <正> 目的:构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白,并纯化。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建pGEX-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌更多还原