SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

【作者】 秦莉； 吴少庭； 王西明； 袁仕善； 黄达娜； 雷民军； 潘晖榕； 高世同； 张仁利； 屈伸；

【机构】 广东省深圳市疾病控制中心分子生物室；

【摘要】 <正> [目的]构建SARS冠状病毒棘突蛋白片段2(S2)的表达质粒pGEX-S2,并表达纯化S2融合蛋白,制备抗S2的多克隆抗体。[方法]采用RT-PCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18-T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落。扩增培养含pGEX-S2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSH-Sepharose亲和层析纯化目的蛋白,SDS-更多还原