树突状细胞疫苗对人化荷人膀胱癌SCID鼠循环微转移转归影响的研究

【作者】 米振国； 王斌； 李志斌； 史天良； 任连生； 张少云； 郭素堂；

【机构】 山西省肿瘤医院；

【摘要】 目的以人外周血淋巴细胞(hu-PBL)腹腔转输方法构建有效的具备人免疫环境SCID鼠模型,研究探讨树突状细胞(DCs)疫苗对荷瘤SCID鼠血循环膀胱癌细胞微转移转归的影响。方法Boyden小室模型体外侵袭筛选膀胱癌细胞株T24,完成三次筛选的子代细胞记作T24-3;自人外周血密度梯度离心分离hu-PBL,4×107/鼠,腹腔注射,1d后取鼠右后肢大腿内侧皮下接种3×106个T24-3细胞,2w、4w、5w、6w不同周次检测鼠体内人免疫细胞水平(包括IgG和CD3+、CD4+、CD8+T细胞)及外周血细胞角蛋白20(CK20)mRNA表达;含10%人AB型血清完全RPMI1640培养基和rhGM-CSF、rhIL-4(终浓度分别为1000ng/ml和20ng/ml),37℃、5%CO2培养体系体外诱导培养人外周血单个核细胞(PBMC)来源DCs,冻融法获得的T24-3细胞裂解上清液以10:1比例(DCs:肿瘤细胞)致敏DCs;并干预人化荷瘤SCID鼠自发血循环肿瘤细胞微转移,观察大体情况、外周血CK20mRNA表达及瘤体MMP-7mRNA表达。结果不同周次时间段鼠血中人IgG均一定水平存在,2w即可检出,其水平并随人化时间延长而逐渐升高,5w人IgG水平较前有所下降,与对照组间差异有统计学意义,F=9.696,P=0.001;人CD3+、CD4+、CD8+T细胞在鼠血及脾中不同的周次时间段均有表达,而对照组均未检出,差异均有显著意义,P<0.05;6w时鼠脾重平均(189.7±56.2)mg,较对照组(38.8±15.9)mg间差异有显著意义,P=0.002。鼠外周血中人细胞角蛋白20mRNA表达分别5w和6w各检出2例,对照组均未检出。于注瘤后5w进行干预。干预后DCs疫苗组0例CK20mRNA(+),0例发生远处转移,PBS对照组2例CK20mRNA(+),3例发生远处转移(其中1例发生肺脏转移,2例髂血管旁淋巴结转移);MMP-7mRNA在DCs疫苗组(19.31±1.35)表达最低,较PBS对照组(101.65±26.53)差异有显著意义,P=0.0073。结论DCs疫苗可以有效控制人化荷人膀胱癌SCID鼠血循环肿瘤细胞微转移发生,进而延缓或阻止肿瘤转移。DCs疫苗可以下调瘤体组织MMP-7mRNA表达,部分降低肿瘤转移潜能。更多还原