IFN-γ对白血病细胞Fas表达的调控及其细胞凋亡的影响

【作者】 卢琳； 李绪彤； 张婷；

【机构】 青岛大学医学院第二附属医院青岛市中心医院肿瘤科；

【摘要】 目的研究白血病细胞的免疫逃避机制,探讨γ-干扰素(IFN-γ)通过对白血病细胞Fas/FasL系统表达的调控而防止其逃避免疫监视的作用,为临床用药提供实验和理论依据。方法应用细胞培养技术、免疫组织化学方法和图象分析系统、荧光染色及TUNEL测凋亡法,检测人髓系白血病细胞株HL-60及临床急性髓细胞白血病(AML)患者单个核细胞(BMMNC)的Fas的表达及相关功能,并研究γ-干扰素对之的影响。结果﹙1﹚与生理盐水对照组比较,光镜观察IFN-γ处理组白血病细胞数量明显减少,生长曲线显示,IFN-γ处理组白血病细胞生长饱和密度降低,表示细胞增殖活性减弱,经统计学处理后,有显著性差异(P<0.05)。﹙2﹚免疫组化方法显示,细胞Fas蛋白主要在细胞膜表达,呈颗粒弥散状分布,正常人骨髓单个核细胞Fas表达较强,对照组白血病细胞Fas蛋白的表达均较正常人骨髓单个核细胞明显减弱,而IFN-γ处理组白血病细胞Fas蛋白的表达较对照组增强,且不同浓度、不同时间处理组间均有显著性差异(P<0.05)。﹙3﹚白血病细胞与Jurkat细胞共培养可引起Jurkat细胞的凋亡,TUNEL法检测,光镜下凋亡细胞核中有棕褐色颗粒,体积缩小,致密染色质连集,断裂成核碎片,形成膜包裹性凋亡小体。非凋亡细胞核为蓝绿色。而加入IFN-γ培养组,Jurkat细胞的凋亡率明显下降,较未加IFN-γ组有显著性差异(P<0.05)。﹙4﹚IFN-γ及抗Fas抗体单独均可致白血病细胞凋亡,TUNEL法检测凋亡细胞形态同上,Hochest33258染色法检测,荧光显微镜下,未凋亡细胞的细胞核染色均匀一致,而凋亡细胞的细胞核染色质高度凝聚、边缘化,或细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体,但凋亡率较低。而经IFN-γ诱导后加抗Fas抗体组白血病细胞的凋亡率较未经IFN-γ诱导组明显增高,两者之间有显著性差异(P<0.05)。﹙5﹚经IFN-γ诱导后加Ara-c组白血病细胞的凋亡率较未经IFN-γ诱导组明显增高,两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论白血病细胞可通过降低Fas表达,杀伤免疫活性细胞及降低凋亡敏感性等以逃避免疫监视,而IFN-γ能针对此种机制,通过对白血病细胞Fas/FasL系统的调控以发挥疗效,从而增加白血病细胞的凋亡,抑制白血病细胞的增殖活性。并且,IFN-γ与以Fas/FasL为靶标的化疗药物对白血病细胞的杀伤有协同作用。更多还原