基因转移制备树突状细胞的实验研究

【作者】 尤长宣； 罗荣城； 张军一； 苏瑾； 廖旺军； 郑航； Paul L Hermonat；

【机构】 广州第一军医大学附属南方医院肿瘤科； 广州第一军医大学附属南方医院呼吸科； 美国阿肯色大学医学院基因治疗中心；

【摘要】 目的:研究以乳腺癌特异抗原BA46基因转移制备树突状细胞(DC)瘤苗的方法。方法:取健康人外周血,采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),以AIM-V培养基于6孔板培养,贴壁5h,轻轻洗去悬浮细胞,取贴壁细胞,将细胞分为基因转移组及对照组,基因转移组感染携带BA46 基因的重组腺相关病毒rAAV/BA46/Neo,对照组以293细胞冻融液刺激,两组细胞均采用重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)诱导DC前体细胞成熟。第7天,收集悬浮细胞,显微镜观察细胞形态,RT-PCR分析BA46表达情况,流式细胞仪分析细胞的表面标志CD80、CD86、CD40的表达情况。结果:两组均有较多细胞呈现典型DC的树突状突起,基因转移组细胞有BA46表达,且该组细胞的表面标志CD80、CD86、CD40的表达均明显高于对照组细胞。结论:BA46基因转移成功制备DC,为乳腺癌的DC基因转移疗法打下基础。更多还原