Transwell侵袭小室技术的改良及其在人骨髓间充质干细胞诱导分化中的应用

【作者】 曲丽梅； 王心蕊； 张秀英； 李玉林；

【机构】 吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室；

【摘要】 目的分离、培养和鉴定人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),应用改良的Transwell侵袭小室技术,探讨血管内皮生长因子(VEGF)及内皮细胞条件诱导液对其体外诱导分化中的作用。方法采用Percoll (1．073g．mL-1)分离液分离骨髓单个核细胞,体外培养MSCs,流式细胞术分析鉴定MSCs的纯度, 在激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)下观察VEGF 受体flt-1和KDR的表达,Transwell侵袭小室技术结合LSCM,实时监测MSCs在Matrigel与 VEGF／内皮细胞条件诱导液构成的内皮细胞生长微环境中的运动迁移情况。结果经Percoll分离、体外培养扩增的MSCs,细胞纯度可达95％左右; flt-1和KDR定位于MSCs的胞膜及胞浆;VEGF 组迁移的深度虽高于对照组(P<0．05),但迁移至聚碳酸脂膜下的细胞与对照组相比,并无统计学意义(P>0．05),内皮细胞条件诱导液促进MSCs 的迁移,在Matrigel内迁移的深度及迁移至聚碳酸脂膜下的细胞均明显多于对照组(P<0．05)。结论共聚焦激光扫描显微术与Transwell侵袭小室技术的结合,能够从时间和空间上对后者进行观察,使该实验得到改良;利用内皮细胞条件诱导液与Matrigel,模拟体外内皮细胞生长的微环境, 并从空间上观测了MSCs穿越人工基底膜的情况, 为MSCs向内皮细胞体外诱导开辟了新的思路。更多还原