人骨髓间充质千细胞体外培养扩增及向心肌细胞诱导分化的实验研究

【作者】 张秀英； 邓方阁； 曲丽梅； 李玉林；

【机构】 吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室；

【摘要】 目的培养人骨髓间充质干细胞 (hMSCs),探讨体外向心肌细胞定向诱导分化的条件。方法取人的骨髓血,用percoll(1.073g／ml) 密度梯度离心及贴壁筛选结合的方法体外培养扩增人hMSCs,检测其生长曲线,并进行流式细胞仪分析鉴定。选用生长良好,纯度达到95％的第五代hMSCs,用不同诱导浓度的5-氮杂胞昔 (5-Azacytidine,1-,5-,10-,or 20μM)孵育24h 进行诱导,对诱导后的细胞进行心肌特异性标志 troponin Ⅰ(cTnI)的免疫组化鉴定。结果体外分离纯化培养扩增出hMSCs,其CD44阳性率平均为93．26±2．48％,与平行对照组(3．42±1．09％) 相比有明显差异(P<0．01)。经5-和10μM 5-Aza 诱导分化的hMSCs表达心肌特异性标记Troponin Ⅰ;10μ M 5-Aza诱导分化的hMSCs阳性率明显高于5μ M组;在20μ M组中,诱导后超过50％的细胞脱落死亡。结论 hMSCs可体外分离培养扩增,并具有向心肌细胞分化的潜能,5-Aza最佳诱导浓度为10μ M。更多还原