人CIDE3基因克隆、真核载体构建及其在脂肪组织中的表达

【作者】 王淑芳； 姚丽； 张静； 叶菁； 程红； 李繁烦； 陈广生； 李青；

【机构】 第四军医大学病理学教研室；

【摘要】 目的克隆人CIDE3全长基因及构建真核表达质粒pcDNA3．1(+)-CIDE3,并检测其在人白色脂肪组织中的表达情况。方法 (1) 提取人腹部皮下白色脂肪组织的总RNA,经 RT-PCR获得CIDE3全长基因并克隆入真核表达质粒pcDNA3．1(+)-CIDE3,构建重组质粒 pcDNA3．1(+)-CIDE3并进行序列测定;(2)测序鉴定重组成功的质粒pcDNA3．1(+)-CIDE3 扩增后,分别用限制性内切酶Xhol Ⅰ和EcoR Ⅰ处理,所得CIDE3目的片段经地高辛标记后作为探针,对人白色脂肪组织中的CIDE3 mRNA进行原位杂交,以观察其在脂肪组织中的分布及表达情况。结果 (1)经RT-PCR扩增得到一特异性的 717bp的目的片段,构建的重组质粒pcDNA3．1 (+)-CIDE3序列测定结果与人基因库中发表的序列完全一致。(2)CIDE3 cDNA探针原位杂交结果显示:在人白色脂肪组织中有CIDE3 mRNA 的表达。结论成功克隆了人CIDE3全长基因, 构建了真核表达质粒pcDNA3．1(+)-CIDE3,并在人白色脂肪组织中检测到CIDE3 mRNA的表达,为我们进一步研究CIDE3对人白色脂肪组织代谢的影响奠定了坚实基础。更多还原