Richter’s综合症:IGVH基因克隆重排及突变分析

【作者】 毛峥嵘； Andreas Rosenwald； 章锁江； 周韧； Hanns Korand Muller-Hermelink；

【机构】 浙江大学病理学与法医学研究所病理学与病理生理学系； Pathology Institute,Wuerzburg University,Germany,97080；

【摘要】 目的慢性B淋巴细胞性白血病(B cell chronic lymphocytic leukemia,B-CLL)患者发展为高度恶性的大细胞淋巴瘤,称Richter’s综合症(Richter’s syndrome)。主要为弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse laree B-cell lymphoma,DLBCL)又称经典型Richter’s综合症。未突变型免疫球蛋白重链可变区(Immunoglobulin heavy chain variable gene,IGVH)基因是B-CLL患者临床恶性进展的指标。携带突变型和非突变型IGVH基因的B-CLL均可向Richter’s综合症。转化的DLBCL可以是与相应B-CLL 克隆相关的,也有克隆不相关的病例。我们收集34例经典型Richter’s综合症,分析其IGVH基因克隆重排及突变状态,以发现Richter’s转化中克隆相关与克隆不相关病例的确切比例,与B-CLL的IGVH 基因的突变状态和预后的关系,以及IGVH基因的特征,并对可能涉及的分子机制进行初步探讨。方法结合手工微切割,用常规酚一氯仿抽提两种肿瘤的DNA,用荧光标记的引物扩增两种肿瘤细胞IGVH 基因的片段(Complementarity determining regions CDR)。用基因扫描分析IGVH基因的克隆性重排及重排片段的长度,初步判断两种肿瘤的关系。并检测克隆性重排的IGVH基因核苷酸序列,进一步确定两种肿瘤的克隆相关性;分析IGVH基因的突变状态及其分子特征。另外用免疫组化染色的方法检测两种肿瘤中ZAP70,p53,IRF-4等可能的潜在危险因子的表达,并结合随防资料进行生存率分析筛选危险因子。结果 1、在完成序列分析的23例B-CLL／DLBCL病例中,有18例B-CLL／DLBCL为克隆相关, 5例为克隆不相关病例;2、在克隆相关的病例中,15例中有11例B-CLL及相应DLBCL携带未突变IGVH 基因;3、在经典型Richter’S综合症中IGVH基因的使用是非随机的,VH3-23,VH3-21及VH3-9基因最常见。在克隆相关的病例中,B-CLL最常使用VH3-9,VH3-23,VH3-74和VH1-2基因,各占11．8％, 前三者也是DLBCL中常见的IGVH基因;4、Richter’S转化的DLBCL仅部分表达CD5(32．1％)和CD23 (14．3％)ZAP70(23．8％),绝大多数表达p53(80．6％)和IRF-4(82．6％);5、17例Richter’S转化的 DLBCL患者中位生存时间为7个月;6、统计分析生存时间与B-CLL／DLBCL是否克隆相关,IGVH基因是否突变,及ZAP70、p53、IRF-4的表达不相关。结论 1、Richter’S转化的DLBCL中克隆相关与克隆不相关的比例为2:1;2、克隆相关的DLBCL多由携带未突变型IGVH基因的B-CLL患者转化而来;3、IGVH基因在向Richter’S转化的B-CLL中使用的偏向性提示了已知或未知抗原在转化中的可能作用;4、Richter’S转化的DLBCL与新生DLBCL在IGVH基因的使用、突变状态,免疫组化染色及预后的不同,提示其可能是一种新的DLBCL亚类。更多还原