3种姜黄色素抑制ox-LDL促牛平滑肌细胞增殖及对LDL-R表达的影响

【作者】 刘艳； 洪行球； 俞颖；

【机构】 浙江中医学院分子医学研究所；

【摘要】 目的本实验旨在研究3种不同结构的姜黄色素单体对抑制ox-LDL促牛平滑肌细胞增殖及对VMSC上LDL-R表达的影响。方法(1)从正常人血清中,以密度梯度超速离心法得1.019-1.060g/ml部分,进一步用Sepharose 6B凝胶过滤,分离纯化LDL,用Cu2+氧化,得ox-LDL;取牛主动脉,用贴块法培养平滑肌细胞(VMSC),传代培养,取第五代VMSC,分别加入ox-LDL2.5-80mg/L观察其对VMSC的促增殖作用。(2)用10 mg/L ox-LDL和66、33、16.5umol/L的姜黄素、脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素培养VMSC,48h后用MTT法测定OD值,反映VMSC的增殖情况;(3)分别用66、33、16.5umol/L的姜黄素、脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素培养VMSC,48h后加入用DiI标记LDL(终浓度为20ug/ml),370℃孵育5h,4%甲醛固定15min,用流式细胞仪检测LDL-R的表达情况。结果(1)ox-LDL在2.5—10mg/L时,对VMSC有明显的促增殖作用,P<0.01,而在80mg/L对VMSC有明显的抑制作用;(2)姜黄素、脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素在16.5umol/L-66umol/L浓度时,对10mol/Lox—LDL培养的VMSC有明显的抑制作用,P<0.01,三种姜黄色素单体的抑制率为姜黄素>脱甲氧基姜黄素>二脱甲氧基姜黄素;(3)三种姜黄色素单体在66、33、16.5umol/L时对VMSC的LDL—R的表达均有明显的上调作用,姜黄素16.5umol/L组与正常组比较,P<0.05,余组与正常组比较P<0.01,上调作用二脱甲氧基姜黄素>脱甲氧基姜黄素>姜黄素,经组间方差分析,P<0.01,与(1)的作用相反。更多还原