氧化型低密度脂蛋白致PC12细胞的毒性作用

【作者】 曹莉； 尹鸿操； 周礼； 王拥军；

【机构】 北京安贞医院神经内科； 中国医学科学院基础医学研究所病理室； 北京天坛医院神经内科；

【摘要】 目的:探讨oxLDL致PC12细胞的毒性作用及其机制。方法:本研究采用密度梯度离心法分离LDL,Cu²⁺诱导法制备oxLDL。将oxLDL及LDL设下列浓度组:0g/ml（空白对照组）、5g/ml、7.5g/ml、10g/ml、12.5g/ml、15g/ml、20g/ml。以PC12细胞作为神经细胞模型,用不同浓度oxLDL处理细胞相应时间。通过透射电镜观察细胞形态的改变;通过MTT实验、LDH释放实验、TUNEL实验及Caspase-3测定来观察oxLDL对细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase-3活性的影响。统计方法:用t检验、单因素及双因素方差分析对数据进行统计学处理。结果:1.经LDL提取及氧化所得的oxLDL的MDA含量为27nmol/mg,电泳迁移率为3.0,符合完全氧化LDL的标准。2.透射电镜:从7.5g/ml的oxLDL组开始细胞形态有改变,一部分细胞呈现坏死表现,小部分细胞呈现凋亡表现。随着oxLDL浓度增加,坏死细胞增加明显,至20g/ml时,主要为坏死细胞。3.MTT实验:从oxLDL5g/ml组（作用时间24h）及16h（OxLDL 10g/ml组）开始,细胞存活率随着浓度及时间增加而下降,与相应浓度组的LDL组相比均有显著差异。LDL各浓度组与正常对照组相比无显著差异。4.LDH释放实验:从oxLDL 7.5g/ml组开始,LDH释放率随着浓度增高而增高,与相应浓度LDL组相比有显著差异。LDL各浓度组与正常对照组相比无显著差异。5.TUNEL实验:从oxLDL 7.5g/ml组开始,TUNEL阳性细胞数随着浓度增高而增高,与正常对照组及LDL组相比有非常显著差异;20g/ml组时,TUNEL阳性细胞数下降。6.Caspase-3活性测定:从oxLDL5g/ml组开始,12h及24h的Caspase-3活性随着浓度增高而增高,至20g/ml时开始下降,与正常对照组及LDL组相比有非常显著差异。4h时酶活性没有改变,12h时最高,24h时下降。结论:1.OxLDL致PC12细胞的毒性作用,主要以坏死细胞为主伴少量凋亡细胞;高浓度时,几乎是坏死作用。坏死细胞表现为电镜下形态改变及LDH释放率的增加;凋亡细胞电镜下形态改变、TUNEL阳性细胞率增加及Caspase-3酶活性的升高。2.oxLDL致PC12细胞的毒性作用呈剂效与时效关系,而LDL无细胞毒性作用。3.oxLDL致PCI2细胞死亡通过Caspase-3途径。oxLDL与Caspase-3活性呈剂效和时效关系。更多还原