用家蚕生物反应器表达TNF及口服蚕蛹TNF的效应研究

【作者】 刘映乐； 胡敏； 齐义鹏；

【机构】 武汉大学病毒研究所；

【摘要】 <正> 我们对杆状病毒表达系统Bac-to-Bac进行改造,利用Helicase是决定核型多角体杆状病毒宿主范围的基因,通过重组hybrid Helicase基因方法,构建既可以在E.coli/昆虫细胞中穿梭,也可以在两种昆虫细胞(Sf-9/BmN)中穿梭的转座双穿梭载体Bonpvid.将0.7kbTNF基因插在转座载体pFastbac的多角体基因启动子下游,转化E.coliDHlOBac(Bm)(其中含有Bonpvid和助手质粒),经Tn7的转座,将TNF基因整合到的Bonpvid的多角体基因位相得到重组Bonpvid,提取重组BonpvidDNA,感染昆虫细胞BmN得到重组病毒vAcBmT。在多角体基因强启动子作用下,vAcBmT在sf-9细胞和家蚕细胞中均可高效表达TNF蛋白;纯化含有TNF蛋白的细胞上清培养液,加入肿瘤细胞(Hela细胞)中,可见肿瘤细胞迅速更多还原