兔胎儿成纤维细胞转外源基因二倍体单细胞克隆株的建立

【作者】 侯健； 安晓荣； 苟克勉； 杨国庆； 陈永福；

【机构】 中国农业大学农业生物技术实验室；

【摘要】 <正> 体细胞克隆技术的成功为转基因动物的生产掀起一场革命,以体细胞克隆法来生产转基因动物的最大优点是,使转基因操作主要集中在细胞水平上完成,从而极大地降低了生产成本和减少了工作强度。本实验对这一过程进行了探索。 从怀孕17日母兔体内采集到3个胎儿,用胰蛋白酶消化法分离出胎儿成纤维细胞,并培养获得三个细胞系RFF1、RFF2、RFF3。sry-PCR法和染色体核型分析法鉴定3个细胞系的性别为:RFF1和RFF3为雄性,RFF2为雌性。选雌性细胞系RFF2用于转基因实验。 质粒pEGFP—N1带有水母绿色荧光蛋白(GFP)基因和新霉素抗性基因(neor)两种标记基因。以此作为报告基因,对脂质体介导的外源DNA转染兔胎儿成纤维细胞系的效率进行了最优化。结果表明,当培养于35mm直径培养皿中的细胞达到60—70％汇合时,2μg DNA更多还原