间斑寇蛛(L.tredecimguttatus)毒液的蛋白质组学研究

【作者】 王贤纯； 段志贵； 周红； 何小珍； 晏晓军； 曹锐； 熊继先； 梁宋平；

【机构】 湖南师范大学生命科学学院；

【摘要】 间斑寇蛛(L.tredeclimguttatus)属蛛形纲,球蛛科,寇蛛属,是目前发现的毒性最强的蜘蛛之一。2000年以来在新疆大量出现间斑寇蛛咬伤人畜的事件,引起了当地政府及学术界的关注。对间斑寇蛛粗毒开展蛋白质组学研究,可以更加全面的了解粗毒的组成、性质和功能。我们通过解剖毒囊后穿刺和活体电刺激两种方法采集间斑寇蛛粗毒(得到的粗毒分别简称毒囊粗毒和电刺激粗毒)。用1D SDS-PAGE和2D-PAGE对两种方法采集的粗毒进行了分离,结果表明毒囊粗毒的蛋白质种类明显多于电刺激粗毒。对两种方法采集的粗毒的1D SDS-PAGE的蛋白质进行胶内酶解,用Q-TOFMS进行分析,共鉴定出73种蛋白质;包括alpha-Latroinsectotoxin、alpha-Latrotoxin、alpha-Latrocrustotoxin、alpha-Latrotoxin precursor、calcium-transpoting ATPase、mitochondrial ATP synthase beta subunit等,其中Latrotoxin类蛋白质是文献报道的寇蛛粗毒中广泛存在的活性成分。毒囊粗毒的2D电泳图谱中分辨出500个左右的蛋白质点,电刺激粗毒的2D电泳图谱中分辨出200个左右的蛋白质点,这些蛋白质大多分布在酸性区域,分子量大多在IOKDa-100Kda之间。在1D胶条上显现出较多的100KDa以上的蛋白质,但2D电泳图谱上100KDa以上的蛋白质较少,这提示在用2D-PAGE分离过程中100KDa以上的蛋白质在IEF时沉淀,这说明1D-PAGE比2D-PAGE更适合分析间斑寇蛛粗毒。对两种方法采集的粗毒的双向电泳凝胶上的蛋白质点进行胶内酶解,经MALDI-TOF-TOF MS和Q-TOF MS分析,共鉴定到了97种蛋白质,其中包括actin、chaperonin、ATP synthase、arginine kinase、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、triosephosphate isomerase、heat shock protein,antigen/hsp70 homologue等。此外还有部分质量很好的MS/MS数据在进行蛋白质数据库搜寻鉴定时得不到明确的鉴定结果,这可能是因为数据库中蜘蛛的基因组与蛋白质组信息有限的缘故。更多还原