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磺基异硫氰酸苯酯化学辅助MALDI-TOF-PSD de novo测序方法对SDS-PAGE分离的蛋白质进行鉴定
【作者】 陈平； 李选文； 曹锐； 孙亚兰； 谢锦云； 梁宋平；
【机构】 湖南师范大学生命科学学院；
【摘要】 <正> 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术对膜蛋白质组分离有其局限性,本实验采用一维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离质膜蛋白质,利用MALDI-TOF质谱源后衰变(PSD)技术结合化学辅助磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)de novo测序方法,对用SDS-PAGE分离的蛋白质进行鉴定。经SDS-PAGE分离的蛋白条带可能含有多个蛋白质,将其切下后首先用trypsin进行胶内酶解,酶解产物用Zip-TipC18柱进行磺基异硫氰酸苯酯固相衍生,然后选定被磺基化的肽片段进行PSD de novo测序。磺基化的肽片段在进行PSD测序时能得到单一的y+离子系列,结合PMF能对样品进行更准确可靠的鉴定。
- 【会议录名称】 中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集
- 【会议名称】中国蛋白质组学第二届学术大会
- 【会议时间】2004-08
- 【会议地点】中国辽宁大连
- 【分类号】Q819
- 【主办单位】中国生物化学与分子生物学会蛋白质组学专业委员会、中国生物化学与分子生物学会中国人类蛋白质组组织