EIAV[hlx1]基因转移载体转录后调控元件的优化

【作者】 韩凌霞； 李亚明； 曲连东； 司昌德； 姜骞； 刘家森；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心；

【摘要】 目的在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体pcPPTPRE(+)的基础上(含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)),对其转录后调控元件进行优化。方法参考登录GenBank的土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)(登录号J04514和NC004107)基因组序列,设计合成一对引物,扩增WHV 转录后调控元件(WPRE),上下游引物均引入NotⅠ酶切位点。扩增产物克隆于pGM-T载体获得重组质粒pGM-T WPRE, 经酶切、PCR和测序鉴定,扩增片段为658bp,与J04514和NC004107的同源性分别为99．4％和98．2％。利用Not Ⅰ酶将 WPRE从pGM-T WPRE亚克隆到pcPPTPRE(+),获得正向插入WPRE的重组质粒pcPPTWPRE。采用磷酸钙法分别将 pcPPTWPRE和pcPPTPRE(+)转染293T细胞,转染后24h、48h和72h在荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果在pcPPTWPRE 转染细胞中EGFP表达阳性的细胞数量明显增多,荧光亮度也相对较强。结论本研究表明EIAV转移载体构建中优化转录后调控元件能明显增强外源基因表达能力。更多还原