槲寄生凝集素增强γδ~+T细胞杀伤功能及调节细胞因子分泌格局的研究

【作者】 余奇文； 张继英； 马妍慧； 柏峻； 聂红； 沈佰华； 王利； 沈天伟； 李伟毅； 李宁丽； 张冬青；

【机构】 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所；

【摘要】 槲寄生(Mistletoe)是一种寄生性植物,可用于治疗淋病、高血压、风湿病等疾病。近年来研究发现,槲寄生不仅具有抗感染、诱导细胞凋亡以及细胞毒作用,还具有一系列免疫调节作用,值得关注的是:槲寄生在辅助治疗肿瘤的应用中获得了引人瞩目的结果。槲寄生发挥免疫调节作用的有效成份主要为槲寄生凝集素(Mistletoe Lectin,ML),ML是一种由A链和B链以二硫键相连的糖蛋白。A链由252个氨基酸组成,分子量约为30 KD,具有干扰核糖体蛋白质合成作用;B链由263个氨基酸组成,分子量约为35 KD,具有和D-半乳糖及N-乙酰半乳糖苷结合的特性。ML的免疫调节作用包括提高淋巴细胞对有丝分裂原的敏感性;增强IL-2受体的表达; 提高NK细胞和LAK细胞的细胞毒功能以及促进趋化因子、TNF-α等细胞因子释放作用以及具有活化T辅助细胞功能,并可使TIL和巨噬细胞聚集在肿瘤细胞周围而发挥抗肿瘤作用。我们采用 MACS阳性分选法,从正常人外周血中分离γδ+T细胞,并采用不同浓度的ML刺激γδ+T细胞, 于不同时间观察ML增强γδ+T细胞对Daudi细胞的细胞毒作用,并观察ML协同LPS对γδ+T 细胞分泌细胞因子的调节作用,探索ML增强γδ+T细胞抗肿瘤作用和免疫调节之机理。结果: 用51Cr释放法检测经不同浓度ML(0,1,10,100和200 ng／ml)不同时间(12,24,48 h)诱导后的γδ+T细胞的细胞毒功能。100ng ML经24h和48 h诱导后,正常人γδ+T细胞对NK不敏感的Daudi细胞细胞毒百分率分别为29．25％,27．34％;200ng ML经24 h和48 h诱导后,正常人γδ+T细胞对Daudi细胞细胞毒百分率分别为25．25％,27．38％。明显高于12h诱导后的细胞毒百分率(100ngML为14．89％,200ng ML为18．88％)及阴性对照组9．89％(P<0．05)。用ELISA 法定量检测细胞因子,正常人外周γδ+T细胞经LPS(25 mg／L)及不同浓度的ML(0,1,10,100 和200 μg／L)诱导24 h后,TNF-α分泌高于单独LPS刺激组(表1),ML加入量为100 μg／L和 200 μg／L两组与单加LPS组比较,具有明显差异(P<0．05);IL-10分泌水平则随ML浓度的增高而下降(表)。ML对IL-1和IL-12的分泌无明显影响(数据未显示)。在ML(100 μg／L)+LPS (25mg／L)诱导γδ+T细胞分泌TNF-α实验中,于ML+LPS加入后不同时段(0;2;4;8;12; 16;20;24h),取培养上清,检测培养中上清中TNF-α浓度,结果显示:当培养达8h时,TNF- α浓度达到最高,随后缓慢下降。更多还原