重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究(Ⅱ)

【作者】 李殿俊； 凌明圣； 刘旭； 许祥裕； 施凤霞； 丁树标； 朱有华；

【机构】 哈尔滨医科大学肿瘤研究所； 南京军事医学研究所；

【摘要】 目的在成功构建人粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)高效表达克隆的基础上对其表达产物进行分离纯化,并对rhGM-CSF在溶液中的构象、稳定性、变复性等进行研究。方法在纯化研究基础上利用博里叶变换红外光谱技术(FTIR)对rhGM-CSF的构象进行研究,同时应用聚乙二醇(PEG)和牛肝二硫键异构酶(PDI)对GM-CSF的的复性及体外折叠作用进行分析。结果利用FTIR技术可见GM-CSF在D20溶液中 20℃时含35％α-螺旋,32％β-螺旋,1l％转角和20％无规卷曲。适当PEG可使蛋白得率和比活性均达到最高,PDI可以提高蛋白质的正确折叠率。结论采用FTIR研究蛋白质在溶液中的构象耗时短、重复性好、样品耗量小,对产品的质量控制及批间产品的稳定性具有指导价值。加入适当比例的PEG和PDI可使蛋白得率和比活性明显提高。更多还原