抑癌基因FHIT真核表达质粒的构建

【作者】 曲迅； 宋文刚； 马世彬； 徐英萍； 邓文； 朱长军；

【机构】 泰山医学院免疫教研室；

【摘要】 目的:脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)位于3p14.2,跨越人类染色体脆性部位FRA3B,是1996年Ohta等克隆的一个新的抑癌基因。大量研究证实,FHIT基因变异广泛存在于各种肿瘤,但FHIT基因的具体抑癌机理及其实际抑癌作用仍没有研究清楚。据此,我们在构建FHIT基因克隆载体pGEM-FHIT的基础上,进一步将FHIT基因克隆至真核表达质粒载体,为深入研究抑癌基因FHIT奠定了基础。构建抑癌基因FHIT真核表达质粒pHCMVsplA-FHIT。方法:用限制性内切酶EcoRⅠ酶切抑癌基因FHIT的克隆载体pGEM-FHIT获得FHIT基因片段,长度为0.9kb,将其插入真核表达载体pHCMVsplA CMV启动子的下游,用HindⅢ酶切鉴定FHIT基因插入方向。结果:PCR扩增及EcoRⅠ、Hind Ⅲ酶切鉴定证实FHIT基因以正确方向插入表达质粒pHCMVsplA中。结论:成功构建抑癌基因FHIT真核表达质粒pHCMVsplA-FHIT,为研究FHIT的抑癌作用提供有效的分子工具。更多还原