HCTP，一种新的特异性穿膜肽与GFP、apoptin融合蛋白的原核表达载体构建及表达

【作者】 钟春燕； 柳长柏；

【机构】 三峡大学分子生物学研究所；

【摘要】 目的:HCTP(HPV tansformed cervical cancer cells targeting penetratin,HCTP)是新近发现的一种能特异性识别并穿透 I-IPV 转化宫颈癌细胞胞膜的短肽。构建 HCTP 分别与绿色荧光蛋白(GFP)、凋亡素(Apoptin)的重组表达载体,原核系统表达并纯化出 GFP-HCTP、Apoptin-HCTP 基因重组融合蛋白,探讨 HCTP 靶向 HPV 相关宫颈癌细胞的特异性穿膜效应。方法:根据美国 NIH 基因库收录的 Apoptin 基因序列,利用多重 PCR 技术拼接出 Apoptin cDNA、运用 PCR 方法以 pEGFP-C1质粒为模版扩增获得 GFP cDNA 片段,将 Apoptin 及 GFP cDNA 分别与退火形成的 HCTP 双链连接并插入经 NdeI 和 XhoI 酶切原核表达载体 pET15b,成功构建 pET15b-GFP-HCTP、pET15b-Apoptin-HCTP 重组表达载体。经 DNA 测序证实重组体构建无误, 用上述两个重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG 诱导融合蛋白表达并用 Ni-NTA His-Bind Resin 蛋白纯化试剂纯化,获得可溶性基因重组融合蛋白 GFP-HCTP 和 Apoptin-HCTP。运用 SDS-PAGE 及 Western blot 分析鉴定目的蛋白。结果:成功构建 pET15b-GFP-HCTP、 pET15b-Apoptin-HCTP 原核表达载体,经表达、纯化制备了 GFP-HCTP 和 Apoptin-HCTP 基因重组融合蛋白。结论:我们使用基因工程技术,经原核表达系统表达制备的 GFP-HCTP 和 Apoptin-HCTP 融合蛋白将为进一步研究 HCTP 靶向 FIPV 相关宫颈癌细胞的特异性穿膜效应以及探讨 HCTP 作为宫颈癌治疗药物的靶向运送载体提供实验基础。更多还原