重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤B16细胞体内转移的研究

【作者】 朱明； 张桂梅； 黄波； 刘毅； 龚伟； 冯作化；

【机构】 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系；

【摘要】 目的研究重组纤粘连蛋白(FN)多肽 CH50对小鼠黑色素瘤 B16细胞体内转移的影响,以探讨 CH50多肽抑制肿瘤转移的可能分子机制。方法体外培养黑色素瘤 B16细胞,用荧光染料 CFSE 标记,接种脾脏后24h 取脾、肝、肺做冰冻切片,观察肿瘤细胞在3 种组织中的侵袭情况。从脾脏接种 B16细胞,建立体内肿瘤转移动物模型,采用基于流体动力学的体内基因转染方法于小鼠体内表达 CH50多肽,RT-PCR 检测 CH50 mRNA 在肝组织的表达,Western 印迹检测 CH50多肽的表达。通过比较原位肿瘤结节及转移结节在数量、大小、分布上的差异及检测原位肿瘤组织中 MMP-2、MMP-9表达差异,观察 CH50多肽的治疗效果。结果注射24 h后即可在脾脏形成荧光结节。pCH510质粒通过尾静脉注射后,可在肝组织中检测到 Cti50 mRNA 及 CH50多肽的表达。从脾脏接种 B16细胞后第14天可在脾脏形成原发肿瘤,至第35天肝脏表面已形成转移瘤结节,成功建立了体内器官间(脾转肝)肿瘤转移动物模型。体内转染表达 CH50多肽能抑制肿瘤生长、侵袭和转移,抑制原位肿瘤结节中 MMP-2、MMP-9的表达。结论 CH50多肽可以通过对 MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用来抑制黑色素瘤 B16细胞的成瘤能力和体内侵袭、转移能力。更多还原