褪黑素对原代培养小脑颗粒细胞模拟缺血再灌注后的保护作用

【作者】 鲁志强； 王西明； 段秋红； 卢涛； 何善述；

【机构】 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系；

【摘要】 研究目的:中枢缺血再灌注能引起神经元继发性损伤,为解决这一问题,我们探讨褪黑素（Melatonin,MT）能否在中枢缺血再灌注中对神经元起保护作用,为临床治疗提供新的治疗措施的依据。研究方法:分离SD乳鼠的小脑颗粒细胞进行原代培养,建立体外模拟缺血再灌注的细胞模型,通过MTT比色和台盼蓝染色的方法检测:模拟缺血再灌注对小脑颗粒细胞的损伤,以及用不同浓度的褪黑素对其孵育不同时间后,观察褪黑素对损伤的抑制作用:采用吖啶橙染色（AO）和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法来观察在该模型中小脑颗粒细胞的损伤是否通过凋亡的途径,以及褪黑素对细胞凋亡的抑制。研究结果:在模拟缺血（OGD）再灌注的细胞模型中,通过吖啶橙染色（AO）和DNA琼脂糖凝胶电泳观察到,经模拟缺血（OGD）再灌注处理的细胞,部分细胞的损伤是通过凋亡的途径,通过台盼蓝染色观察到部分细胞的损伤是通过坏死的途径。用10^-8M和10¹⁹M的MT孵育该细胞48小时后与OGD组相比,细胞的存活率明显提高（P<0.05）:用10^-7M的MT孵育24小时后与OGD组相比,细胞的存活率就已明显提高（P<0.05）:药理剂量的MT(10^-6M,10^-5M,10^-4M)孵育12小时后与OGD组相比,细胞的存活率就明显提高（P<0.05）。各剂量组细胞的存活率:都随着孵育时间的延长而增强。而且,当浓度介于10^-9M和10^-5M之间时细胞的存活率随着剂量的增加而增强。说明MT能够抑制模拟缺血（OGD）再灌注所诱导的细胞凋亡,降低死亡。结论:研究结果提示:中枢缺血再灌注可引起神经元细胞继发性损伤,这种损伤是凋亡和死亡并存。MT对于中枢缺血再灌注后的神经元继发性损伤有抑制作用,对于中枢缺血再灌注的神经元有保护作用。更多还原