5株猪圆环病毒2型地方分离株的克隆、序列测定及进化分析

【作者】 黄伟坚； 连慧香； 罗廷荣； 陆芹章； 蒋小红； 余克伦； 刘芳； 温荣辉； 韦英益；

【机构】 广西大学动物科学技术学院；

【摘要】 猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起断奶仔猪多系统衰竭征(PMWS)的主要病原体。PMWS最早于1991年在加拿大猪群中发现,随后在美国、西班牙、法国、德国、意大利、比利时、荷兰、丹麦、爱尔兰、墨西哥、日本、韩国和中国等主要养猪国家也证实了该病的存在。该病以断奶仔猪消瘦、皮肤苍白、黄疸,淋巴结肿大为特征,发病率及死亡率很高。PCV-2在体内的靶细胞是淋巴细胞,引起细胞凋亡,导致免疫抑制,容易继发其他疾病,造成更大的损失。通过对各地PCV-2序列进行测定和比较分析,对了解PCV-2流行特征和发病机理是十分重要的。本研究参考Genbank上国内外猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2 PCV-2)全基因组序列,设计一对引物,应用反向PCR方法从广西、广东的5个猪场患PMVCS的断奶仔猪淋巴结中扩增出5个长约1800 bp片段,克隆到PMD-18T载体上,并进行测序,结果表明,5株PCV-2地方株的全基因组序列长度均为1767bp,5株PCV-2核苷酸序列同源性为95.3%-100%,进化树分析上,5株PCV-2分为三个小分枝,gxt223和gxt227关系密切,同源性达100%,gxu224和gxu228关系密切,同源性为99.9%, gxu222与其他4株分离株同源性相对较低,仅为95.3-95.8%。5个PCV-2与21个国内PCV-2分离株比较,它们的核苷酸序列同源性94%-99.9%.与GenBank中发表的国内外51个PCV-2分离株及4个PCV-1分离株核苷酸序列进行进化树分析。PCV-1与PCV-2之间明显不同,分成两个不同的基因型。5个地方分离株与PCV-1之间核苷酸序列同源性仅为70%左右,而与PCV-2之间序列同源性为94%以上。基于核苷酸序列同源性差异,PCV-2毒株之间分为两大群,其中一个群由5个地方分离株、15个其他国内分离株、3个法国株与1个荷兰株组成,另外一群由国内5个分离株及国外分离株组成。表明5个PCV-2是来源于国内种猪,而不是来源于国外引种的。更多还原