人外周血树突状细胞的分离培养及免疫学持性的研究

【作者】 梁安民； 罗小玲； 谢裕安； 吴继宁； 匡志鹏；

【机构】 广西医科大学肿瘤医院生物治疗中心；

【摘要】 目的:从人外周血分离、纯化、扩增树突状细胞(DC),并对其形态学和免疫学特性进行初步探讨。方法:人外周血经梯度密度离心分离,获得的含DC前体细胞组分(主要为CD14~+细胞)用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CsF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增成熟DC。光镜及电镜观察DC形态;流式细胞仪分析DC表型;姬姆萨染色法分析DC核型;混合淋巴细胞反应检测DC激发同种异体淋巴细胞增殖能力。结果:分离的DC前体经rhGM-CSF和rhIL-4共同培养1周后,可获得大量成熟DC,由2.9×10~5DC前体扩增至7.1×10~6成熟DC,扩增了24.7倍,纯度达90%以上。DC具有典型的树突状或裙褶样突起,高表达分化抗原:CD86、CD40、HLA-DR、CD83、CDIa。DC为正常的二倍体细胞,能强烈激活同种异体T淋巴细胞增殖。结论:人外周血CD14+细胞经体外诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,从而为进一步开展DC的基础研究和临床应用打下基础。更多还原